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传染性支气管炎病毒S1蛋白基因的克隆与原核表达_论文

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C h i n e s e   J o u r n a l   o f   Ve t e i f n a  ̄ Me d i c i n e   中国兽 医杂志 2 0 1 5 年( 第5 1 卷) 第4 期  3 5   传 染性 支气 管炎病毒 S   1蛋 白 基 因  的 克 隆 与 原 核 表 达  李 中华 ,肖运 才 , 胡思顺 , 吴仁 蔚 , 毕 丁仁  ( 1 . 福 建省 动物 疫病 预 防控制 中心 , 福 建 福州 3 5 0 0 0 3; 2 . 华 中农 业 大学 动物 医学 院 , 湖北 武汉 4 3 0 0 7 0 )   摘要 : 根据 G e n B a n k中 I B V基 因序 列 , 设 计 合成 一对 引 物 , 成 功地 从 I B V   H5 2 基 因组 中扩增 了 s l 基 因 O经测 序证 实  该 序 列全 长 1   6 8 5   b p , 编码 5 3 8 个 氨基 酸 。为便 于 表达 , 对 其进 行弃 信 号肽 克 隆 , 然 后定 向连接 到表 达 载体 中获 得重 组  表 达 质粒 p G E X - S I , 转 入 受体 菌 , 经 诱导 成 功 的表 达 了重组 蛋 白 G S T — S 1 。S D S - P A G E 显示 , 该蛋 白约 为 8 O   k D, 占菌 体  总蛋 白的8 %, We s t - b l o t 表明 , 其具有 良好的免疫学活性 。I B V   S 1 基因的克隆和表达 , 为研究病原与细胞相互作用、 开  发 基 因工程 疫苗 奠定 了基 础 。   关键 词 : 传 染性 支气 管炎 病毒 ; 纤 突蛋 白 ; 克隆 ; 原 核表 达  中 图分 类号 : ¥ 8 5 5 . 3   文献 标志码 : A   文章 编 号 : 0 5 2 9 — 6 0 0 5 ( 2 0 1 5 ) O 4 — 0 0 3 5 一 O 3   Cl o ni ng   a n d  Ex p r e s s i o n   o f   t he   S1   Pr o t e i n  o f   I n f e c t i o us   Br o n c h i t i s   v i r u s   i n   Pr o ka r yo c y t e   LI   Zh o n g — hu a  ,XI AO  Yun — c a i  ,HU  S i — s hu n 2,W U  Re n — we i  ,B BI   Di ng — r e n   ( 1 . F u j i a n   P r o v i n c e   A n i m a l   D i s e a s e   C o n t r o l   C e n t e r , F u z h o u   3 5 0 0 0 3 , C h i n a;   2 . C o l l e g e   o f   V e t e i r n a r y   Me d i c i n e , Hu a z h o n g   Ag r i c u l t u r e   U n i v e r s i t y , Wu h a n   4 3 0 0 7 0 , C h i n a )   A b s t r a c t : A c c o r d i n g   t o   p u b l i s h e d   S 1   p r o t e i n   g e n e   s e q u e n c e   o f   I n f e c t i o u s   B r o n c h i t i s   v i r u s ( I B V) i n   G e n b a n k , s p e c i f i c   p i r me r s   we r e   d e s i g n e d   a n d   s y n t h e s i z e d. A  1   6 8 5   b p   f r a g me n t   o f   S1   g e n e   e n c o d i n g   5 3 8   a mi n o   a c i d s   W a S   a mp l i i f e d   ro f m  RNA  o f   I B V  b y   RT —   P C R. a n d   t h e n   s u b c l o n e d   i n t o   p r o k a r y o t i e   e x p r e s s i o n   v e c t o r   p GE X—KG   i n   t h e   f o r m  o f   v e c t o r   p GEX—S 1   a f t e r   s i na g l   p e p t i d e s   w e r e   d e l e t e d. T h e   f u s i o n   p r o t e i n   S 1 - G S T( a b o u t . 8 0 k D a ) w a s   s u c c e s s f u l l y   e x p r e s s e d   a n d   W s  a a b o u t   8 %p e r c e n t   o f   b a c t e r i l a   p r o t e i n s   i n   t h e   a n ly a s i s   o f   S DS — P AGE   s h o wi n g   g o o d   i mmu n o c o mp e t e n c e   t h r o u g h   We s t e


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